|
微生物限度檢測是評估藥品、食品等產(chǎn)品中微生物污染程度的重要方法，其操作步驟需嚴(yán)格遵循無菌原則和標(biāo)準(zhǔn)化流程。以下是綜合多個(gè)來源的核心操作步驟及技術(shù)要點(diǎn)：
一、前期準(zhǔn)備環(huán)境與設(shè)備 - 檢測需在萬級潔凈室內(nèi)的百級層流超凈工作臺進(jìn)行，定期驗(yàn)證環(huán)境沉降菌（≤1 CFU/皿）和壓差。
- 儀器（如微生物限度檢測儀、離心機(jī)）及玻璃器皿（平皿、吸管等）需提前滅菌處理。
試劑與培養(yǎng)基 - 配制稀釋液（如pH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液）及培養(yǎng)基（營養(yǎng)瓊脂、玫瑰紅鈉瓊脂等），經(jīng)121℃高壓滅菌后備用。
人員與防護(hù) - 操作者需穿戴無菌服、口罩、手套，手部用75%乙醇消毒，實(shí)驗(yàn)過程中嚴(yán)格避免交叉污染。
二、樣品處理取樣要求 - 隨機(jī)抽取≥3倍檢驗(yàn)量的樣品，固體取10g、液體取10ml，膜劑需≥4片或100cm2。
供試液制備 - 常規(guī)樣品：固體研磨后加稀釋液制成1:10供試液；液體直接稀釋或原液檢測。
- 特殊樣品：
- 油脂類：加入無菌十四烷酸異丙酯或聚山梨酯80乳化后稀釋。
- 抑菌性樣品：采用薄膜過濾法（如抗生素類）或中和劑處理。
三、接種與培養(yǎng)細(xì)菌/霉菌計(jì)數(shù) - 平皿法：取供試液1ml注入無菌平皿，傾注45℃以下融化的培養(yǎng)基（營養(yǎng)瓊脂用于細(xì)菌，玫瑰紅鈉瓊脂用于霉菌/酵母菌），搖勻后凝固培養(yǎng)。
- 薄膜過濾法：供試液經(jīng)濾膜過濾后沖洗（總沖洗量≤1000ml），濾膜貼于培養(yǎng)基表面培養(yǎng)，適用于抑菌性樣品。
控制菌檢查 - 如大腸埃希菌、沙門氏菌等，采用增菌培養(yǎng)（膽鹽乳糖培養(yǎng)基）→分離培養(yǎng)（選擇性瓊脂）→生化鑒定的步驟。
培養(yǎng)條件 - 細(xì)菌：30-35℃培養(yǎng)3-5天；霉菌/酵母菌：23-28℃培養(yǎng)5-7天。
四、結(jié)果觀察與分析菌落計(jì)數(shù) - 使用菌落計(jì)數(shù)器或顯微鏡觀察，記錄各稀釋級的菌落數(shù)，以平均菌落數(shù)計(jì)算CFU/g或CFU/ml。
控制菌判定 - 陽性對照需檢出目標(biāo)菌，陰性對照無菌生長，否則實(shí)驗(yàn)無效。
五、方法學(xué)驗(yàn)證回收率試驗(yàn) - 加入標(biāo)準(zhǔn)菌株（如金黃色葡萄球菌、黑曲霉），驗(yàn)證樣品抑菌性是否消除，回收率需≥70%。
方法選擇依據(jù) - 根據(jù)樣品特性選擇常規(guī)法、培養(yǎng)基稀釋法或薄膜過濾法，確保檢測結(jié)果準(zhǔn)確。
六、注意事項(xiàng)- 實(shí)驗(yàn)全程需無菌操作，避免二次污染。
- 抑菌性樣品需優(yōu)先采用薄膜過濾法或離心集菌法處理。
- 定期對培養(yǎng)基進(jìn)行適用性檢查（如促生長試驗(yàn)）。
| 
|Archiver|小黑屋|制造論壇
( 浙B2-20090312-57 )|網(wǎng)站地圖
發(fā)表于 2025-2-20 14:48:12
