綿羊饑餓激素（GHRL）ELISA試劑盒操作步驟

行動(dòng)派

上海遠(yuǎn)慕生物詳細(xì)為您介紹綿羊饑餓激素(GHRL)ELISA試劑盒操作步驟，信息說明及其他咨訊，本司是ELISA試劑盒供應(yīng)商，提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù)，種屬有：大鼠ELISA檢測(cè)試劑盒，小鼠ELISA檢測(cè)試劑盒，人ELISA試劑盒，馬ELISA檢測(cè)試劑盒，羊ELISA檢測(cè)試劑盒，猴ELISA試劑盒，豬ELISA試劑盒，狗ELISA檢測(cè)試劑盒，植物ELISA試劑盒，猴ELISA試劑盒，其他動(dòng)試劑盒，訂購(gòu)！

　　【信息說明】
　　中文名：綿羊饑餓激素(GHRL)ELISA試劑盒
　　別名：綿羊饑餓激素(GHRL)ELISA Kit
　　供應(yīng)商：上海喬羽
　　規(guī)格：48t/96t
　　保存：2-8℃
　　有效期：6個(gè)月
　　適用范圍：本試劑盒僅供科研使用，不得用于臨床。
　　用途：用于測(cè)定人血清,血漿,組織及相關(guān)液體樣本中的含量或活性。
　　特點(diǎn)：靈敏性高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好。
　　ELISA試劑盒種屬：人、大鼠、小鼠、豚鼠、兔子、豬犬、牛羊、雞鴨、植物ELISA試劑盒等。
　　檢測(cè)目的：用于測(cè)定血清，血漿及相關(guān)液體等樣本。例如適合檢測(cè)包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標(biāo)本。
　　【性能優(yōu)點(diǎn)】
　　1、準(zhǔn)確性：標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值，大于等于0.9900。
　　2、靈敏度：zui低檢測(cè)濃度小于10 pg/ml。
　　3、特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
　　4、重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。
　　【樣本處理】
　　1、血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心
　　2、血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心
　　3、細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清
　　4、組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用
　　5、培養(yǎng)細(xì)胞：檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
　　【操作步驟】
　　實(shí)驗(yàn)開始前，請(qǐng)?zhí)崆芭渲煤盟性噭?，試劑或樣品稀釋時(shí)，均需混勻，混勻時(shí)盡量避免起泡。每次檢測(cè)都應(yīng)該做標(biāo)準(zhǔn)曲線。如樣品濃度過高時(shí)，用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍。
　　1、加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。 為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
　　2、棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加標(biāo)記抗體工作液 100μl(取1μl標(biāo)記抗體加99μl標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時(shí)內(nèi)配制)，37℃,60分鐘。
　　3、溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。
　　4、每孔加辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素工作液(同標(biāo)記抗體工作液) 100μl，37℃，60分鐘。
　　5、溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。
　　6、依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色(30分鐘內(nèi)，此時(shí)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度藍(lán)色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止)。
　　7、依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。
　　8、用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度(OD值)。 在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。
　　【注意事項(xiàng)】
　　1、實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
　　2、試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。
　　3、使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器。
　　4、不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
　　5、洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
　　6、使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
　　7、加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
　　8、按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
　　9、底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長(zhǎng)時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
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